细胞生物学的研究范例(3篇)

细胞生物学的研究范文

虽然近年来对大肠癌治疗的研究已经取得了很大进展，但始终不能改变其发病率和死亡率高的特点，对患者预后亦无明显改善。因此，本研究探讨δnp73基因的高表达对大肠癌细胞生物学行为的影响，为临床防治大肠癌提供较可靠的理论依据。

1材料与方法

1.1实验材料

lovo细胞株及真核表达质粒pcdna3δnp73均由第三军医大学大坪医院肿瘤科惠赠。rpmi1640培养基、小牛血清购自hycolone公司。胰蛋白酶购自sigma公司。millicellchamber购自millipore公司。四甲基偶氮唑蓝(mtt)、青霉素、链霉素均购自gibco试剂公司。vegf试剂盒购自r&d公司。

1.2lovoδnp73细胞株的建立

以人类大肠癌细胞株lovo细胞为研究对象，将构建于真核表达质粒pcdna3δnp73基因用脂质体法转染lovo细胞，用g418沉筛选出过表达δnp73基因的细胞株，命名为lovoδnp73细胞株；同时以空载体pcdna3转染细胞，命名为lovopcdna3。

1.3台盼兰活细胞记数测定细胞的增殖能力与细胞活力

胰酶消化收获细胞（含悬浮及贴壁细胞）制备单细胞悬液，以冷pbs悬浮，细胞浓度为1×105/ml。取9滴细胞悬液移入小试管内，加1滴0.4%台盼兰工作液，混匀，在3min内用血球记数板分别记数活细胞和死细胞。

1.4细胞增殖曲线mtt测定

取对数生长期细胞悬液200μl/孔（含2×103个细胞）接种至96孔板，于37℃、5%co2、饱和湿度培养箱，每组每天取3个复孔，每孔加入20μlmtt（5g/l）培养4h后弃培养液，每孔加入二甲基亚砜(dmso)200μl，振荡10min溶解结晶紫。酶联免疫检测仪测定490nm波长各孔光吸收值（a490值）。

1.5流式细胞仪检测细胞凋亡

将lovo细胞制备成单细胞悬液，收集到5ml离心管中，离心，2000g，5min，室温，冷pbs洗涤2次，离心，2000g，5min，弃上清。再以冷pbs悬浮，细胞浓度为1×106ml。加5mlannexinvfitc溶液和2.5μlpi到100μl细胞悬液中，混匀后室温避光反应30min。加入反应缓冲液400μl，流式细胞术对凋亡细胞进行定量检测。

1.6boyden小室体外侵袭实验

用改良的boyden小室法[1]：用人工基质覆盖millicellchamber滤膜上的微孔，向小室内加入1×105/ml的细胞悬液,培养12h后取出滤膜,将下室面的细胞刮下，将膜固定，结晶紫染色细胞，高倍镜下随机取5个视野,计数细胞,取平均值。

1.7westernblot检测vegf蛋白表达

按照ripa蛋白提取步骤提取细胞总蛋白,采用bradford法测定总蛋白浓度。取总蛋白40μg行sdspage,电泳结束后电转印17h至pvdf膜,膜封闭液内封闭室温1h,4℃过夜,pbs洗膜5min×4,加入兔抗人vegf单克隆抗体(1∶350),37℃孵育1h,pbs洗膜5min×4,再加入羊抗兔igg(1∶2000),37℃孵育1h,pbs洗膜5min×4,化学发光试剂与pvdf膜共同孵育1min,将pvdf膜与x光片共同放暗盒曝光4min,显影3min,定影10min。以gelproanalyzer凝胶定量分析软件分析westernblot检测结果,得出各条带的灰度值,以平均灰度值代表vegf蛋白表达水平。

1.8统计学方法

数据结果以±s表示,采用t检验,spss10.0统计学软件进行分析。

2结果

2.1台盼兰拒染实验

台盼兰拒染实验中活细胞不染色，而死细胞染蓝色。结果显示δnp73转染后lovo细胞的死细胞比例为（4.6+1.1）%,较lovopcdna3组（7.5+0.8）％明显减少，差异有统计学意义（p<0.01）。

2.2mtt法测定细胞生长曲线

mtt结果显示，转染δnp73的lovo细胞较转染空载体pcdna3的lovo细胞组和空白对照组细胞生长明显增快，差异有统计学意义（p<0.01），见图1。

图1mtt法测定细胞生长曲线

2.3基因转染对大肠癌细胞凋亡率的影响

fitcpi流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示转染空载体pcdna3的lovo细胞组凋亡率为（5.8＋1.2）％，而转染δnp73的lovo细胞组的凋亡率为（2.4＋0.8）％，与lovo/pcdna3组对比凋亡率明显降低（p<0.01），见图2。

图2δnp73转染对lovo细胞凋亡的影响

2.4boyden小室体外侵袭实验

lovo、lovopcdna3和lovoδnp73细胞穿过人工基底膜的细胞数分别为（21.4±0.1）、（22.8±0.4）和（39.5±0.6）,lovoδnp73细胞与lovo细胞和lovopcdna3细胞比较,穿膜数量明显增加,两者间差异具有统计学意义(p<0.01)。而lovo细胞和lovopcdna3细胞穿膜数的差异无统计学意义(p>0.05)。

2.5vegf蛋白表达westernblot检测结果

vegf蛋白表达westernblot检测结果见图3。转染pcdna3后lovo细胞中vegf蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(p>0.05),而转染δnp73能使vegf蛋白表达水平升高,灰度值上升，与未转染p73基因的细胞相比上升了44.2％，差异有统计学意义(p<0.05)，见表2。表2转染δnp73前后lovo细胞中vegf蛋白含量

3讨论

研究表明δnp73因为n末端转录活化区缺失导致转录活化功能完全丧失,对p53和全长型p73的转录活化和促凋亡活性有明显的负调节作用[2,3],δnp73除与大肠癌的发生、发展关系密切外，对神经母细胞瘤也是一个预示较差预后的分子标志[4]。但在某些肿瘤中，如甲状腺肿瘤，δnp73却有着抑制增殖的作用[5,6]。由于δnp73基因在不同的肿瘤中对细胞凋亡和血管生成的影响不同，因此本实验以δnp73基因在对大肠癌细胞的生长、凋亡率、体外侵袭性以及对血管调节因子的表达调节作为主要切入点进行了研究。

本实验采用台盼兰拒染、mtt测定对转染后细胞的体外生长情况进行了分析。台盼兰拒染、mtt测定均可反映细胞的增殖情况，但作用的机制与侧重点不同。台盼兰是一种有机染料，当细胞损伤或死亡时，可透过细胞膜与解体的dna结合，使其着色，而活细胞阻止其进入，借此可鉴别活细胞和死细胞。本实验用该方法测定细胞的总数与存活率。mtt是一种淡黄色的化合物，它参与活细胞线粒体的能量代谢。在活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶可将mtt还原成难溶性的紫兰色结晶物formazan并沉淀在细胞中，而死细胞无此功能。在一定的细胞范围内，mtt结晶物形成的量与活细胞数成正比。dmso能溶解细胞中蓝紫色的结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可以间接反映活细胞数量。我们认为，台盼兰拒染实验操作简单，方便快捷，但结果受人为因素影响较多。mtt法较客观准确，是一种较好的判断细胞增殖的指标，而boyden小室体外侵袭实验，则为检测大肠癌细胞转染δnp73基因后的侵袭力改变提供了直接证据。本实验将3种实验方法的结果相结合分析更具准确性和说服力。进一步流式细胞分析提示δnp73基因转染lovo后细胞凋亡比例明显减少。这一结果提示δnp73基因过表达可以促进大肠癌细胞的恶性增殖，其可能的机制是δnp73的过表达通过影响p73的反式激活而导致其启动子活性的减弱,抑制p73诱导的凋亡[2]。

除了上述指标，目前，对大肠癌的细胞生物学行为的研究中还有一个研究热点就是肿瘤血管生成[7]。vegf是迄今鉴定出来的最重要的促血管生成因子之一,vegf能特异地与血管内皮细胞上vegf受体结合,刺激内皮细胞增殖并促进血管形成。因此,vegf是反映大肠癌细胞生物学行为的良好指标。在本研究中,采用westernblot法检测高表达δnp73的细胞中的vegf蛋白表达水平,发现过表达δnp73大肠癌细胞株中vegf蛋白的表达较对照组明显增高,表明δnp73的高表达打破了血管生成因子和抗血管生成因子之间的平衡,从而促进了血管生成。其可能的机制是当大肠癌发生时,抑制因子表达下调、刺激因子上调,并伴随着癌基因激活和抑癌基因失活从而促使病理性血管生成[8,9]。本实验结果提示δnp73的高表达能促进大肠癌血管生成，增强了其侵袭和转移的能力，这也给我们今后对大肠癌临床治疗研究提出了一个思路和课题：有效的抑制δnp73的过度表达，可以在基因水平上抑制大肠癌血管的生成，从而对癌肿的生长和侵袭起到有效的抑制作用。

综上所述，δnp73以高表达的方式参与大肠癌的发生发展，抑制大肠癌细胞凋亡，上调血管生成因子vegf的表达，促进了大肠癌血管增生，增强了大肠癌细胞的侵袭性。鉴于δnp73基因对大肠癌细胞的这些影响,我们认为，对δnp73进行检测，有利于从基因水平了解大肠癌的发生机制和生物学行为，从而对大肠癌作前瞻性估计，为临床上对大肠癌的诊断、鉴别诊断、治疗及预后判断提供重要的参考指标，同时，还可将δnp73作为新的肿瘤治疗靶点进一步深入研究。

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细胞生物学的研究范文篇2

1关节软骨ECM的主要成分及其功能

关节软骨ECM主要成分为水、胶原、蛋白多糖及非胶原蛋白等。

1.1胶原(collagen)：胶原占AC干重的50%～80%，主要是II、IX、XI型胶原，尤其以II型胶原为主，占软骨胶原总量的90%～95%，是关节软骨的特异性胶原[2]。关节软骨不同位置的胶原类型是有差异的，因此各型胶原所起作用也有区别。关节软骨组织学分层由内向外分为：钙化带、深层带、中间带、表层带[3]。II型胶原主要分布于深层带和中间带，交织成三维网状，其中镶嵌蛋白多糖聚合体，结合水和带点离子，固定蛋白多糖，为软骨提供抗张强度。IX、XI型胶原主要位于II型胶原表面，可能与II型胶原的网状结构稳定性有关[4]。III型和X型胶原分别在表层和深层、钙化带出现，可能与软骨的钙化有关[5]；VI型胶原在软骨细胞附近较多，能与多种细胞外基质成分作用，具有细胞锚定和信号传递的作用[6]。

另外，各层胶原纤维走向也不同。钙化层的胶原纤维呈网状分布，深层胶原呈辐射状排列，间层胶原具有过渡性，从细长且紧密平行状逐渐变无序，表层带胶原则按切线方向走向[7]。胶原纤维走向变异这一特性，可能影响关节软骨的形状、稳定性、拉伸强度和抗剪切力的能力[8]。

1.2蛋白多糖(proteoglycan，PG)：关节软骨中的蛋白多糖，主要以聚集体形式存在，该聚集体由透明质酸（Hyaluronan，HA）、蛋白多糖单体以及连接蛋白共同组成，其中HA为骨架链，PG单体通过连接蛋白与HA相连[9]。而PG单体由氨基多糖（透明质酸除外）与核心蛋白共价结合而成，其中的氨基多糖主要是硫酸软骨素、硫酸角质素等[2]。HA是关节软骨中最主要的氨基多糖，在生理性溶解状态下它的无规则卷曲的特殊结构，提供了软骨组织的粘弹性能[10]。蛋白聚糖属于透明质酸结合蛋白家族[9]，HA将游离的聚集蛋白聚糖固定于胶原纤维网之间，保持软骨组织完整性。另一方面，蛋白多糖中常有带负电荷的糖胺聚糖长链，这些负电荷相互间的排斥力形成渗透膨胀压，可将大量水分子限制于蛋白多糖中形成凝胶，从而使软骨具有良好的粘弹性和膨胀能力[11]。

1.3非胶原蛋白：除了最主要的成分外，关节软骨细胞外基质还有一些非胶原性蛋白，如软骨连接蛋白、软骨寡聚基质蛋白（cartilageoligomericmatrixprotein，COMP）等。软骨连接蛋白可通过其亚单位上的结构域与细胞外基质其他成分相结合，起连接软骨细胞与细胞外基质的作用[12]。COMP作为细胞外基质的结构蛋白之一，属于血小板反应蛋白家族，被称为血小板反应蛋白-5[13]，有证据显示COMP在细胞外基质装配过程中起重要作用[14]，因此，有学者认为COMP在关节软骨中具有相对特异性,可以作为衡量关节软骨损伤或治疗效果的标记物之一[15]。

2生物力学因素对关节软骨ECM主要成分的影响

力学刺激可调节软骨细胞增殖及细胞外基质成分的代谢平衡，这点已被广为认可。关节软骨在各种功能状态下所负荷的力学刺激主要分为压应力、张应力、剪切力。

2.1压应力：生理条件下，AC在机体内主要承受间歇性生理液态压力。关节功能运动可使关节的静态和动态受力[16]。体外实验中，静态压力主要可通过将体外培养的软骨细胞或软骨组织置于密闭容器中，以气体和/或液体压强的改变，作用在介质表面上，传递压力至软骨细胞的方法获得；而在培养容器加上蠕动泵或其他具有周期性的施力装置，可以得到稳定的压力。Smith[17]对体外培养的成人关节软骨细胞施加液体静压力，分别给予4h10Mpa大小的持续静压力和频率为1Hz的间歇静压力，结果两者都会影响II型胶原和蛋白聚糖的合成，并且间歇力对胶原和蛋白多糖的刺激作用似乎更大。之前Michael等[18]在对琼脂凝胶培养中的软骨细胞施加静态及动态压力的研究中得到了类似的结论。Davisson等[19]也证实组织工程化培养的关节软骨，在受到过大的静态压缩力时可能抑制胶原和蛋白多糖的总合成，而这时同样的动态压缩力会促进胶原和蛋白多糖合成增加。copray等[18,20]的研究结果显示0.5g持续压力可以使硫酸粘多糖和胶原蛋白减少；力值接近0.5g大小频率为0.7hz的间歇压力则可能刺激基质成分的合成。

动物实验的研究结果与体外实验结果相一致。Trudel等[21]将大鼠膝关节持续制动，发现膝关节软骨被软化，软骨组织减少，正说明静态负荷过度后，导致了软骨的分解代谢增多。许可等[22]研究异常压应力作用于兔膝关节软骨时，II型胶原随时间越长先增加，后减少，说明软骨退化程度逐渐加深。

2.2张应力：在人的各项机体活动中，相对于压应力和剪切力来说，关节软骨受到张力作用的时候很少，但它仍可能存在于人类日常生理活动中，甚至是在没有外在施加负荷时，一定程度的张力也可能存在[23]。有人研究了在符合生理功能的动态张力刺激下，关节软骨发生适应性改变[24]。Fan等[25]对体外培养的关节软骨组织放置在一个二轴向拉伸应力装置下，施加持续或间歇的正常生理范围内张力，结果显示在适当条件下间歇静张力可以刺激组织工程化的软骨生长。另一方面持续静张力则对软骨细胞新陈代谢不起作用或者是相反作用。安丙辰[26]就不同强度张应力对关节软骨细胞II型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达进行研究，分别对体外培养的人股骨头关节软骨细胞施加3%、6%、15%延伸率的张应力刺激，结果15%延伸率的张应力可明显抑制关节软骨细胞II型胶原的表达，但聚集蛋白聚糖表达改变不明显，作者认为可能和功能适应性有关。顾延等[27-28]的研究也一同说明了异常应力刺激可以影响关节软骨正常生理活动及ECM成分的合成。

2.3剪切力：体外剪切力的获得主要通过以下几种方法：①机械搅拌式：通过叶轮或浆形搅拌器等持续转动，使细胞离心，在持续搅动的培养液中生长；②直接灌注式：也称循环流体系统，是将培养液挤压进支架内部，使细胞感受流体剪切力；③旋转壁式：由改良的直接灌注式而来，是利用液体流动力和重力形成的低水平剪切力。目前更多地应用于关节软骨细胞体外三维立体培养的研究中，为软骨组织工程化方向的研究提供线索及依据。Smith等[29]对单层软骨细胞施加1.6N/m2剪切力，发现GAG增加2倍，但同时伴有炎性因子表达增加。朱立新[30]的研究说明体外软骨组织立体培养在低转速（初始10r/min，3天后为15r/min）离心力刺激作用下，可出现胶原及蛋白多糖的合成增多。

通常在各种力学刺激作用于关节软骨时，ECM成分变化的同时会出现一系列相关细胞因子的变化。Sakurai等[31]阻止大鼠的咀嚼运动后，发现髁突软骨关节盘厚度减少，胰岛素类样生长因子-I受体表达也降低，说明力学作用不止可以调节ECM代谢，还可以影响与ECM代谢密切相关的胰岛素类样生长因子-I。Tanaka等[32]发现虽然血管内皮细胞生长因子(VascularEndothelialGrowthFactor，VEGF)在成人正常软骨中不表达，但当软骨细胞暴露在炎性环境或过度的机械力作用下，VEGF的表达会重新上调，从而导致OA的发生。而基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases，MMPs）作为降解基质的最重要酶之一，被学者发现其亚型MMP-1、MMP-3和MMP-9在病理状态下的软骨和滑膜关节下大量出现[33]，也是很容易理解的，只是具体调节机制尚未完全清楚。还有一些前炎性细胞因子可以在颞下颌关节炎患者的滑膜液里发现，如：转化生长因子-β,肿瘤坏死因子-α,白介素-1β,白介素-6等，提示这些细胞因子的出现可能是对颞下颌关节的病理降解过程的反应[34-35]。

3力与关节软骨细胞外基质间可能的传导途径

力学刺激可影响关节软骨ECM成分的新陈代谢，而此代谢受软骨细胞调控，这说明力学信号与细胞外基质和/或细胞之间存在某种关联。目前，普遍认可在力学信号传导过程里起重要作用的是细胞膜表面受体分子，尤以整合素（integrin）研究最多，另外一些可能的传导途径有：由Raf激酶抑制蛋白（Rafkinaseinhibitorprotein，RKIP）调控的分裂原活化蛋白激酶通路（Mitogenactivatedproteinkinase，MAPK），细胞骨架（cytoskeleton，CSK）改建途径等。

整合素可以通过细胞骨架连接细胞、细胞外基质和各复杂的细胞内信号传递分子，是力学信号的介导，调节多种细胞的生存、繁殖、分化以及基质代谢[36]。整合素包括α和β两个亚单位，软骨细胞内表达的与软骨基质配体相应的几种整合素受体主要有α1β1,α2β1,和α10β1（主要是II型胶原）；α5β1,αvβ3,αvβ5和α6β1（主要针对连接蛋白）[36-37]。Holmvall等[38]在软骨细胞及软骨肉瘤细胞中分离到α1β1和α2β1整合素，且发现两种整合素表现出对Ⅱ型胶原的高亲和性，力刺激作用下，II型胶原和蛋白多糖成分mRNA明显增加，整合素无明显改变，说明α2β1整合素很可能介导了力学刺激。Spiteri等[39]发现在可促进组织工程化体外培养的小牛关节软骨ECM合成的周期性压力下，如果阻止了α5β1整合素的表达，则有可能抑制细胞扩散以及基质累积，这样的结果说明体外周期性压力刺激在细胞内的传导和反馈能调节基质的合成，同时也说明整合素在此过程中起重要作用。

RKIP属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族，最初于1999年由Yeung等[40]报道，它是一种和Raf-1激酶区域相互作用的蛋白，是MAPK通路的内源性信号调控者，同时也与G蛋白偶联受体信号转导通路、NF-κB信号通路相关[41-42]。狭义的细胞骨架是指真核细胞的蛋白纤维网架体系，既具有产生主动变形的能力，又具有抵抗被动变形和受力的能力。细胞骨架蛋白中与力学刺激相关的蛋白主要是肌动蛋白、波形蛋白等[43]。目前，主导观点认为MAPK信号通路与细胞骨架之间存在“交叉对话/双向调节”作用，即MAPK级联通路的活化涉及细胞骨架，而细胞骨架结构重排又是通过MAPK介导的细胞骨架相关蛋白磷酸化来完成[44]。有研究指出MAPK通路对力学刺激下的关节软骨细胞的增殖分化也有影响，同时细胞骨架相关蛋白也发生改变，说明MAPK通路和细胞骨架蛋白与力学传导相关，只是相应压力刺激下的各项指标之间的联系及其机制，仍然不明[45]。

4展望

力是一把双刃剑，不管是张力、压力、剪切力，还是持续力、间歇力，力学刺激对于关节软骨ECM的影响均是双向的。普遍认为，接近正常生理状态的力学刺激可促进ECM的合成，而过度的力学刺激则会导致ECM的分解增多或合成减少[17，19]。综上所述，AC的功能与其生物力学特息相关，软骨的生物力学特性利于分散压力和吸收负荷，相应生物力学刺激不仅影响软骨ECM的合成，还对软骨下骨的短期或长期损伤及改建也起关键性作用。因此，有必要对软骨细胞以及细胞外基质的力学传导调控机制进行细致生物力学特性分析，这对关节仿真模型的开发与关节软骨组织工程重建研究极为重要。生物力学因素在不同情况下对关节软骨细胞外基质的影响其内在的调节途径及机制尚待进一步研究。

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细胞生物学的研究范文

细胞衰老是细胞不可逆的失去增殖能力的过程，被认为是机体抑制肿瘤发生的重要屏障[2]。但是也有研究表明衰老细胞可以通过分泌表型促进肿瘤发生。因此，细胞衰老与肿瘤之间的关系还需要进一步的研究。而对细胞衰老发生的分子机理的理解，有助于我们开发新的肿瘤治疗策略。目前已经发现多种基因毒性刺激都能诱发细胞发生早熟性细胞衰老，如端粒缩短、原癌基因激活、辐射损伤、活性氧损伤等，这些刺激都能引发DNA损伤[3]。

细胞衰老存在于多学科中，属于交叉学科，它自产生就与抽象、深奥的哲学紧密联系、相互促进。

一、细胞衰老学说的研究，离不开哲学思维的发展

哲学的发展来源于人类在探索世界时候的不断反省，通过对生命的意义的思索，促进着自然科学的发展。20世纪60年代，Hayflick和Moorhead等人[4]在体外培养人正常成纤维细胞时发现：多株体外培养的正常人成纤维细胞，在经历多次细胞分裂之后，并没有无限制的增殖，而是发生了增殖失败现象。当排除了因细胞体外培养和营养需求改变等因素的影响后，他们确定这是细胞固有的一种生理状态。而与此现象相佐证的是：胚胎来源的成纤维细胞的增殖能力要比成体来源的成纤维细胞的增殖能力更强。这种现象使得他们提出了细胞衰老（Cellsenescence）的概念，并认为这种细胞增殖失败的现象与器官的老化是相关联的[5]。西方医学的很多发展都源于哲学的进步，他们观察自然和人类生活的变化，产生哲学思辩，从而研究物质存在的机制。西方的哲学发展较快，较为进步，正式哲学的发展促进了其他学科的发展，哲学思维给予了医学正确看待生命与健康的理论指导。医学家在哲学世界观与方法论的指导下，从事基础医学研究，推动着医学进步发，促进了基础医学的进步。

二、细胞衰老学说研究要靠实践的唯物主义哲学思想

细胞衰老机制研究是一门医学基础的研究，归从于细胞生物学研究，必须通过反复的实验进行验证。而细胞衰老对于机体器官的衰老，机体本身的衰老都是其研究的基础，是其理论基础，哲学思想充斥在科学实践与理论思维之中。细胞衰老机制研究是一个基础认识过程，由感性认识到理性认识，从机体自然界的生老病死的现象，使人类产生研究其基本结构单位细胞的想法，对细胞衰老的机制研究，进一步解开人类机体衰老的奥秘，从认识到实践，实践再进一步指导认识，实现科研造福于人类的意义。

三、细胞衰老学说研究依靠哲学思维发挥出社会效应，实现价值

哲学对医学的发展具有世界观的理论指导意义，细胞衰老学说的发展也不例外。列文虎克发明第一台显微镜,初步认识了微生物，人类就开始了细胞学说的研究。从细胞的大体结构，细胞壁、细胞器、细胞核的研究，到微细的细胞结构中细胞各组织结构的功能，细胞内信号的传导、物质的代谢，再到细胞生长、增殖、衰老、凋亡机制的研究，所有这些都离不开哲学的指导需要哲学思维价值观来指导任一学科的发展，同时细胞衰老学说的研究，必然伴随社会价值的体现，人类向往永生，向往肌肤的永生，甚至生命的永生，所以哲学承担起揭示医学科学社会效应的责任，指导细胞衰老的研究来充分发挥出其社会效应，这涉及人的出现，生存、发展等一系列哲学问题。离开了哲学，科学的理论基础就将崩塌。物理学家玻恩曾经说“每个现代科学家，都深刻地意识到自己的工作是同哲学思维错综地交织在一起，要是没有对哲学文献的充分认识，他们的工作会是无效的”[6]。细胞衰老学说的研究不是独立的个体，它是普遍联系的，将之与环境问题，经济问题，社会人文问题、法律问题等等综合研究才能真正实现社会价值，为社会的发展，社会的前进起到应有的作用。

四、细胞衰老学说离不开哲学思维的唯物辩证法

科学研究中的哲学思维是与一般科研思维融入一体，真正的唯物主义哲学并不认为假说是唯心的，需要通过不断地提岀新的假说或假设，然后通过构建科学技术，进不去证明。假说或假设是科学无法存在的基础，是科学向前发展的动力。这就是科学的理性主义态度或方法论。用胡适先生说科学的态度或方法就是“大胆地假设，小心地求证”[7]。假设-验证是医学科学家常常使用的思维方式。细胞衰老学说就是首先通过假设，然后通过实验的不断证实进行的，只有不断的假设，不断的通过基础实验去验证，才能使衰老学说的机制得到很好的验证，才能不断的进步，不断的探究，更好的使用在机体衰老机制的研究。

五、正确认识事物的逻辑方法